Indah Wijayanti's Weblog — Here I am,..

It's a new world – it's a new start….

pengukuran aktifitas enzim xilanase

on June 12, 2009

Komponen Reagen Dinitrosalisilic Acid (DNS) (Miller, 1959)

Bahan

Jumlah

NaOH padat

NaK Tartarat

Na2SO3

Dinitrosalisilic Acid (DNS)

aquades

10 gram

182 gram

0,5gram

10 gram

Ditera sampai 1000 ml

 

          Sebanyak 10 gram NaOH, 182 gram NaK Tartarat dan 5 gram Na2SO3 dilarutkan dalam 500 ml aquades.  Ditambahkan 10 gram asam dinitrosalisilat sedikit demi sedikit sambil diaduk dengan pengaduk bermagnet (magnetic stirrer).  Setelah larut ditambahkan aquades dan ditera sampai volume 1000 ml.  Larutan disimpan dalam botol gelap pada suhu dingin.

Pengujian Aktifitas Enzim Xilanase

Aktifitas enzim xilanase ditentukan dengan mengukur gula pereduksi yang dihasilkan dari hidrolisis 100 µl substrat oat spelt xylan (1% dalam 0,1 M buffer Tris-Hcl pH 7.5) oleh 0.01 ml enzim pada suhu optimalnya (70oC) selama 30 menit. Banyaknya gula pereduksi yang terbentuk diukur dengan metode DNS (Miller, 1959).  Pengukuran  dilakukan dengan cara menambahkan 1 ml reagen DNS (3,5-dinitrosalysilic acid) untuk mengakhiri reaksi enzimatis dan dipanaskan dalam air mendidih selama 15 menit. Setelah didinginkan diukur nilai absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 550 mn. Kontrol dibuat dengan perlakuan yang sama dengan sampel, hanya penambahan enzimnya setelah campuran ditambahkan pereaksi DNS. Blanko dibuat dengan menggunakan aquades. Satu unit aktifitas enzim (U) adalah banyaknya enzim yang  dapat memproduksi 1 μmol xilosa /menit/ml pada kondisi tertentu

 

Aktivitas xilanase (U/ml) dihitung berdasarkan rumus:

Aktifitas Xilanase (unit/mL) = [(Csp-Ckt)x1000xfp]/T x BM xilosa

Keterangan :

Csp    = Kadar xilosa sampel

Ckt     = Kadar xilosa kontrol

T        = waktu inkubasi

Fp      = faktor pengenceran

BM xilosa= Berat molekul xilosa : 150,3 g/mol


4 responses to “pengukuran aktifitas enzim xilanase

  1. arihevea says:

    Pusing.com mbak Dhienn…. gak paham kimiaaa..

  2. Risky yandi says:

    Dear Bu Indah,

    Salam kenal, saya merupakan alumni TPG IPB angkatan 2002 dan saat ini bekerja di sebuah PMA food & beverages section mikrobiologi. Mohon infonya sejauh mana aplikasi penggunaan xilanase ini di dunia pakan ternak indonesia? Saat ini saya baru berhasil mengisolasi Thermoascus aurantiacus, merupakan penghasil xilanase berkualitas baik. Mold jenis ini sudah banyak diteliti dan diaplikasikan di thailand sebagai hydrolysis agent of non starch polysaccharides (NSPs).

    Regards.

    Risky

  3. Audia Mega says:

    sumber rumusnya cantumin dunk mbak…

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s

%d bloggers like this: